Datos técnicos
Instrucciones de uso de columnas/placas para desalinización c18
Introducción del producto
Las columnas/placas de desalinización C18 están rellenas de una matriz de gel de sílice C18, cuyo grupo funcional, octadecilo, presenta alta hidrofobicidad y excelentes propiedades de retención para compuestos apolares. Las columnas/placas de desalinización C18 pueden adsorber moléculas de cebador/oligo/ADN con DMT sin retención de sales, lo que resulta en productos de cebador/oligo/ADN de alta pureza.
Guía de selección
BM Life Sciences ofrece columnas/placas de desalinización C18 en diversos tamaños, y puede elegir la columna de desalinización adecuada según la concentración de cebadores/oligosacáridos. Para el procesamiento por lotes, puede optar por una placa de desalinización de 96 pocillos.
| Número de producto | norma | Especificaciones de oligonucleótidos aplicables | Pasos de referencia |
| SPEC18W150 | 50 mg/1 ml | 10 nmol - 200 nmol | Paso 5 |
| SPEC18W3100 | 100 mg/3 ml | 10 nmol - 600 nmol | Paso 1 |
| SPEC18W3300 | 300 mg/3 ml | 10 nmol - 2 .opmol | Paso 2 |
| SPEC18W61000 | 1 g/6 ml | 1 umol - 6 umol | Paso 3 |
| SPEC18W9630 | Placa de 30 mg/96 pocillos | 5 nmol - 100 nmol | Paso 4 |
| SPEC18W9650 | Placa de 50 mg/96 pocillos | 10 nmol - 200 nmol | Paso 4 |
| SPE15C18W9680 | Placa de 80 mg/96 pocillos (placa de 96 pocillos de 1,5 ml) | 10 nmol - 500 nmol | Paso 5 |
| SPE23C18W9680 | Placa de 80 mg/96 pocillos (placa de 96 pocillos de 2,3 ml) | 10 nmol - 500 nmol | Paso 5 |
Nota
La columna/placa de limpieza C18 también puede desalinizar el producto crudo y el cebador/oligo después de la purificación por HPLC y PAGE, consulte el paso 5 para obtener más detalles.
Reactivo
Acetonitrilo de grado cromatográfico
0,1 M de té, pH 7,0
0,5 M de NaCl
Solución de lavado (5 % de acetonitrilo disuelto en 0,5 M de Nacl)
Ácido trifluoroacético (TFA) al 3%
agua desionizada
20% acetonitrilo
Tampón TE: 10 mmol/L Tris-cla, 1 mmol/L EDTA, pH 8,0
Paso 1
Preparación de la muestra
Agregue 0,5 M NacI a la muestra de oligonucleótidos hasta un volumen de 2 mL.
Activación de la columna de desalinización
Activación: Se utilizó 1 mL de acetonitrilo para activar la columna.
Equilibrar la columna con 1 mL de solución de TEAA 0,1 M (pH 7,0).
Proceso de limpieza
1. Pase 2 ml de solución que contenga oligonucleótidos a través de una columna de desalinización.
2. Enjuague la columna 2 veces con 1 mL de solución de lavado para eliminar las secuencias fallidas.
3. Enjuague la columna 2 veces con 1 ml de agua desionizada para eliminar las sales.
4. Enjuague la columna 2 veces con 1 ml de ácido trifluoroacético al 3% para eliminar el DMT y observe que la capa adsorbida se vuelve de color rojo anaranjado; y
5. Enjuague la columna de desalinización dos veces con 1 mL de agua desionizada para eliminar el ácido trifluoroacético y las sales residuales.
6. Eluir 1 ml de acetonitrilo al 20 % y ensamblar.
Paso 2
Preparación de la muestra
Agregue 0,5 M NacI a la muestra de oligonucleótidos hasta un volumen de 4 mL.
Activación de la columna de desalinización
Activación: se utilizaron 2 mL de acetonitrilo para activar la columna.
Equilibrio: equilibre una columna de 2 mL con 0,1 M TEAA (pH 7,0).
Proceso de limpieza
1. Pase 4 ml de solución que contenga oligonucleótidos a través de una columna de desalinización.
2. Enjuague la columna 2 veces con 2 ml de solución de lavado para eliminar las secuencias fallidas.
3. Enjuague la columna 2 veces con 2 ml de agua desionizada para eliminar las sales ;)
4. Enjuague la columna 2 veces con 2 ml de ácido trifluoroacético al 3% para eliminar el DMT, la capa de adsorción se ha vuelto de color rojo anaranjado.
5. Enjuague la columna con agua desmineralizada dos veces con 2 mL de agua desionizada para eliminar el ácido trifluoroacético y las sales residuales.
6. Eluir 2 ml de acetonitrilo al 20 % y ensamblar.
Paso 3
Preparación de la muestra
Agregue 0,5 M Nac a la muestra de oligonucleótidos hasta un volumen de 10 mL.
Activación de la columna de desalinización
Activación: Se utilizaron 5 mL de acetonitrilo para activar la columna.
Equilibrado: La columna se equilibró con 10 mL de TEAA 0,1 m (pH 7,0).
Proceso de limpieza
1. Se pasaron 10 mL de solución que contenía oligonucleótidos a través de una columna de desalinización.
2. La columna se lavó dos veces con 5 mL de solución de lavado para eliminar las secuencias fallidas.
3. Enjuague la columna dos veces con 5 mL de agua desionizada para eliminar las sales.
4. Lave la columna dos veces con 5 mL de ácido trifluoroacético al 3% para eliminar el DMT y observe que la capa de adsorción se ha vuelto de color rojo anaranjado.
5. Enjuague la columna dos veces con 5 ml de agua desionizada para eliminar el ácido trifluoroacético y los residuos de sal.
6. Eluir 5 ml de acetonitrilo al 20% y recoger.
Paso 4
Preparación de muestras
Agregue 0,5 M Nacl a la muestra de oligonucleótidos hasta un volumen de 0,5 mL.
Activación de placa de 96 pocillos
Activación: se pasaron 0,5 ml de acetonitrilo a través de cada pocillo de una placa de 96 pocillos.
Equilibrio: Equilibrar una placa de 96 pocillos con 0,5 mL de solución de TEAA 0,1 M (pH 7,0).
Procedimiento de limpieza
1. Pase 0,5 ml de solución que contenga oligonucleótidos a través de una placa de 96 pocillos.
2. Enjuague la placa de 96 pocillos 2 veces con 0,5 ml de solución de lavado para eliminar las secuencias defectuosas.
3. Enjuague la placa de 96 pocillos 2 veces con 0,5 mL de agua desionizada para eliminar las sales.
4. Lave la placa de 96 pocillos 2 veces con 0,5 ml de ácido trifluoroacético al 3 % para eliminar el DMT y observe que la capa de adsorción se vuelve de color rojo anaranjado; y
5. Enjuague la placa de 96 pocillos dos veces con 0,5 ml de agua desionizada para eliminar el ácido trifluoroacético y los residuos de sal.
6. Eluir 0,5 ml de acetonitrilo al 20 % y recoger el material.
Paso 5
Preparación de muestras
Agregue 0,5 M Nacl a la muestra de oligonucleótidos hasta un volumen de 1,2/2 mL.
Activación de placa de 96 pocillos
Activación: pasar de 1 a 4 ml (0,5 mL) de acetonitrilo por cada pocillo de una placa de 96 pocillos.
Equilibroving: equilibre una placa de 96 pocillos con 1-4 mL de 0,5 mL de solución de TEAA 0,1 M (pH 7,0).
Proceso de limpieza
1. Pase 0,5-2 ml de solución que contenga oligonucleótidos a través de una placa de 96 pocillos.
2. Enjuague la placa de 96 pocillos 2 veces con 1/2 mL de solución de lavado para eliminar las secuencias desafortunadas ;)
3. Enjuague la placa de 96 pocillos dos veces con 1/2 mL de agua desionizada para eliminar las sales.
4. Lave 2 veces la placa de 96 pocillos con 1/2 ml de ácido trifluoroacético al 3 % para eliminar el DMT y observe que la capa de adsorción se vuelve de color rojo anaranjado;
5. Enjuague la placa de 96 pocillos con 1/2 mL de agua desionizada 2 veces para eliminar el ácido trifluoroacético y los residuos de sal.
6. Eluir 1/2 ml de acetonitrilo al 20 % y recoger el material.
Paso 6
Reactivo
Acetonitrilo de grado cromatográfico
0,05 M de té, pH 7,0
2 M TÉ, PH 7.0
Agua desionizada (para desalinización y purificación de moléculas de ARN sin ARNasa) 60% de acetonitrilo (disuelto en agua que contiene 0,5% de NH4OH)
20% de acetonitrilo (para desalinizar moléculas de ADN o ARN después de la desprotección)
Tampón TE: 10 mmol/L Tris-cla, 1 mmol/L EDTA, pH 8,0
Preparación de la muestra
Oligonucleótidos purificados por HPLC: Añadir una cantidad adecuada de TEAA 0,1 M a los oligonucleótidos purificados por HPLC para que la concentración final de acetonitrilo sea ≤5 %. Oligonucleótidos purificados: Disolver los fragmentos de gel que contienen oligonucleótidos en TEAA 0,05 M, retirar los fragmentos de gel y disolver el oligonucleótido en al menos 2 ml de TEAA 0,1 M.
Oligos disueltos en NH4OH o AMA: Evaporar hasta secar y disolver en 2 mL de TEAA 0,1 M.
Activación de la bomba de desalinización
Activación: Se utilizó 1 mL de acetonitrilo para activar la columna.
Equilibrio: equilibre una columna de TEAA de 1 mL y 2 M (pH 7,0).
Procedimiento de desalinización de oligos para purificación por HPLC
1. Pasar la solución que contiene oligonucleótidos a través de la columna de desalinización.
2. Enjuague la columna de desalinización dos veces con 1 mL de agua desionizada para eliminar las sales.
3. Eluir a través de una columna de 1 ml de acetonitrilo al 60% y recoger.
Procedimiento de desalinización de oligos purificados por el método PAAG
1. Pasar la solución que contiene oligonucleótidos a través de la columna de desalinización.
2. Enjuague la columna de desalinización dos veces con 1 mL de agua desionizada para eliminar las sales.
3. Eluir a través de una columna de 1 ml de acetonitrilo al 60% y recoger.
Procedimiento para desalinizar oligones de ADN después de la síntesis
1. Pasar la solución que contiene oligonucleótidos a través de la columna de desalinización; y
2. Enjuague la columna TEAA 0,1 M de 1 mL dos veces para eliminar las secuencias fallidas.
3. Enjuague la columna de desalinización dos veces con 1 ml de agua desionizada para eliminar las sales.
4. Pasar la columna a través de 1 ml de acetonitrilo al 20% y ensamblar.
Procedimiento de desalinización de oligos de ARN tras la síntesis
1. Pasar la solución que contiene oligonucleótidos a través de la columna de desalinización.
2. Enjuague la columna con 2 ml de TEAA 0,1 M.
3. Enjuague la columna con 2 ml de agua libre de ARNasa.
4. Pasar 2 ml de acetonitrilo al 20 % (agua libre de ARNasa) a través de una columna, eluir y recolectar. Almacenamiento de oligonucleótidos
Los oligonucleótidos disueltos en acetonitrilo al 20% y almacenados a 4°C previenen el crecimiento de microorganismos y son adecuados para el almacenamiento a corto plazo.
Los oligonucleótidos en una solución de acetonitrilo al 20% (o disueltos en un tampón alcalino como TE) se pueden almacenar durante mucho tiempo a temperaturas tan bajas como -20 °C.
Los oligonucleótidos en forma de polvo liofilizado se pueden almacenar durante mucho tiempo.
Advertencia
Las cantidades de reactivos utilizadas son sólo recomendaciones y deben optimizarse en cada caso específico.
Las cantidades de reactivos utilizadas son sólo recomendaciones y deben optimizarse caso por caso.
La columna de desalinización debe alcanzar un equilibrio de activación suficiente para eluir los residuos en la columna/placa y mejorar su capacidad de unión. El muestreo de oligonucleótidos sintetizados debe realizarse lentamente para evitar que el polvo de CPG entre en la columna/placa para su limpieza y contaminación cruzada.
Las columnas/obleas de desalinización C18 utilizan una matriz de sílice, el rango de pH aplicable es de 2 a 7, un pH > 7,5 disuelve fácilmente la matriz de sílice, un pH
Al usar TFA para desalinizar DMT, preste atención al tiempo, ya que demasiado tiempo tendrá el efecto de eliminar la purina.
Estar adjunto
Columnas de síntesis de fritas B&M Universal CPG Tecnología de desalinización y purificación rápida
Columnas de síntesis de fritas B&M Universal CPG Tecnología de desalinización y purificación rápida:
Las fritas CPG universales de B&M están hechas de polietileno ultra puro de peso molecular ultra alto importado y polvo CPG importado, procesados con tecnología especial, tienen un buen efecto de síntesis en la columna de síntesis, baja tasa de mutación y calidad de producto confiable.
Una vez completada la síntesis en el sintetizador de la serie Dr.Oligo/Mermade y disuelto el amoníaco, Oligo se puede eluir directamente a la columna de síntesis y, después de dosificar y drenar, se puede usar para la reacción de PCR de rutina directamente sin pasos de purificación adicionales, lo que es conveniente de operar, ahorra costos y entrega más rápida.
Los pasos específicos de la operación son los siguientes:
1, columnas/placas sintéticas Synthesis B&M Universal CPG Frits 400 ul, mezcla de agua ultrapura con acetonitrilo al 75 % lavada dos veces para eliminar los reactivos sintéticos residuales;
2, B&M Universal CPG Frits Columnas/placas de amólisis de amoníaco sintético, 90 °C, 80 PSI, amólisis de amoníaco 2-2,5 h;
3, 100% acetonitrilo 400L lavar columna/placa sintética, dos veces;
4, mezcla de agua ultrapura al 90 % de acetonitrilo, 400 ul, lavado de columna/placa sintética, dos veces, bombeo en seco;
5、Volumen apropiado de eluyente para eluir cebadores en la columna/placa sintética, el eluyente puede ser agua ultrapura, puede ser una mezcla de agua ultrapura con trietilamina al 3%, también puede ser una mezcla de agua ultrapura con acetonitrilo al 20%.
6、La solución de elución se puede medir, dispensar, drenar, empaquetar y enviar.