Datos técnicos
Instrucciones de uso de la columna/placa de desalinización sephadex g-25
Introducción del producto
La columna/placa de desalinización Dextran G-25 utiliza principalmente la función de tamiz molecular en sus compuestos de polímero en gel de dextrano con estructura de red. Debido a los diferentes pesos moleculares de las sustancias separadas, al pasar a través del gel G-25, las sustancias de mayor peso molecular (como las proteínas) quedan bloqueadas fuera de las partículas de gel y fluyen a través del espacio entre ellas. El proceso es corto y rápido, por lo que las sustancias de mayor peso molecular saldrán primero de la columna/placa. Las sustancias de menor peso molecular (como las sales) pueden penetrar en los microporos de las partículas de gel. El proceso es largo y lento, y las sustancias de mayor peso molecular tardan más en fluir fuera de la columna/placa de gel, por lo que finalmente se lavan y, por lo tanto, se separan.
Los parámetros de los medios de la serie Sephadex G-25 se muestran en la tabla
| Proyecto | paramétrico |
| Características | Gel blanco sucio |
| Tamaño medio de partícula (seca) | 150 ± 100 μm 92,8 |
| Distribución del tamaño de partícula (45-165 μm) % | ≥80 |
| Split Range (portugués) | 100-5000 |
| Rango de separación (globulina) | 1000-5000 |
| Relación de agua (ml de pegamento húmedo/g de polvo seco) | 2.3-2.7 |
| Caudal lineal (0,3 MPA, cm/h) | 697.1 |
| Caudal máximo (cm/h) | 150 |
| Solución de conservación | 0,2 M de NaAc y 20 por ciento de etanol |
| condiciones de almacenamiento | 4 °C-30 °C |
El número de modelo G indica la cantidad de agua absorbida por gramo de gel, por ejemplo, el medio de gel G-25 indica que se absorben 2,5 ml de agua por gramo de gel seco, es decir, el coeficiente de expansión del gel, que también es el tamaño de poro de las partículas de gel.
Los medios de cromatografía de la serie Sephadex G-25 se utilizan ampliamente para el intercambio de tampón, la desalinización de proteínas, la separación de proteínas de diferentes pesos moleculares, etc. El volumen máximo de muestra para la desalinización y el tampón puede ser de hasta el 30 % del volumen del lecho de la columna.
Flujo de trabajo
1. Equilibrado del altavoz/tableta: Una vez que el altavoz/tableta con el Sefadex G-25 precargado esté en posición vertical, equilibre la columna/tableta de desalinización G-25 con un tampón de 5 a 10 veces el volumen de la capa de la columna. (Nota: El tampón es el que se debe reemplazar, por ejemplo, PBS, agua desionizada, etc.; tenga cuidado, controle el caudal).
2. Muestreo: Una vez equilibrada la columna/placa de gel con el tampón, pipetee la muestra y añádala lentamente al tamiz sobre la superficie del gel. Abra la tapa inferior y deje que la muestra penetre lentamente en el gel hasta que esté al ras. (Nota: El volumen de muestra en la parte inferior suele ser del 10 al 30 % del volumen de la capa de la columna; la viscosidad de la muestra no debe ser demasiado alta; de lo contrario, se acortará la vida útil del prensaestopas G25).
3. Elución: La muestra se eluye con un tampón de elución una vez que ha entrado completamente en el gel. (Nota: El caudal de muestra recomendado es de aproximadamente 1-2 ml/min. El volumen de elución suele ser de 1,2 a 2,0 veces el volumen de la muestra).
4. Purificación y regeneración: Algunas proteínas se desnaturalizan en solución salina, por lo que puede ser necesario purificar estas proteínas lavando el lecho de la columna con NaOH 0,2 M u otro detergente no iónico.
5. Almacenamiento: Después del experimento, almacenar en solución de azida de sodio al 0,02% o solución de etanol al 20%.